qPCR mit Sonden .

 

Unsere primaQUANT Probe qPCR Master Mixe sind für alle gängigen Arten von Sonden-Assays geeignet:

• Primer-Sonden
• Hydrolyse-Sonden (TaqMan, MGB-TaqMan, Snake Assay)
• Hybridisierungs-Sonden (Hybprobe or FRET, Molecular Beacons, HyBeacon, MGB-Pleiades, MGB-Eclipse, ResonSense, Yin-Yang or displacing);
• Nukleotidanaloge (PNA, LNA, ZNA, non-natural bases: Plexor primer, Tiny-Molecular Beacon)

Weitere Informationen finden sich in dem folgenden Review:

Navarro, E., Serrano-Heras, G., Castaño, M. J., & Solera, J. (2015). Real-time PCR detection chemistry. Clinica Chimica Acta, 439, 231–250. https://doi.org/10.1016/j.cca.2014.10.017

Der primaQUANT Probe qPCR Master Mix ist perfekt für Genotypisierung mittels Sonden. Durch Multiplexing können dabei mehrere Marker parallel detektiert werden.

Matsuda, K. (2017). PCR-Based Detection Methods for Single-Nucleotide Polymorphism or Mutation: Real-Time PCR and Its Substantial Contribution Toward Technological Refinement. Advances in Clinical Chemistry, 80, 45–72. https://doi.org/10.1016/bs.acc.2016.11.002

Zur Bestimmung der Expression eines Gens (Gen- oder RNA-Expression) muss zuvor die Gesamt-RNA in cDNA umgeschrieben werden.

Wenn Sie die cDNA-Synthese in einem separaten Schritt durchführen wollen, ist unser primaREVERSE RT-Kit erste Wahl.

Alternativ können Sie die RNA auch ohne vorherige Umschreibung direkt in unser primaQUANT 1STEP RT-qPCR Kit einsetzen.

Bei Multiplex qPCR-Assays verwendet man mehrere targetspezifische Sonden parallel, die jeweils mit einem unterschiedlichen Fluoreszenzfarbstoff markiert sind. Auf diese Weise lassen sich die Expressionswerte mehrerer Targets oder Gene zeitsparend parallel bestimmen. Dieses elegante Verfahren ist insbesondere in der Diagnostik weit verbreitet.

Hawkins, S. F. C., & Guest, P. C. (2017). Multiplex Analyses Using Real-Time Quantitative PCR. In P. C. Guest (Ed.), Multiplex Biomarker Techniques: Methods and Applications (pp. 125–133). Springer. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-6730-8_8

Auch zur Diagnostik von Pathogenen wird häufig quantitative PCR eingesetzt.

DNA-Pathogene (DNA-Viren, Bakterien, Pilze) können so direkt analysiert werden. Für RNA-Viren, z.B. SARS-COV2, ist eine Umschreibung der RNA in cDNA notwendig. Dafür ist unser primaREVERSE RT cDNA-Synthese Kit bestens geeignet. Sie können aber auch unseren primaQUANT 1-STEP Master Mix verwenden, der cDNA-Synthese und qPCR in einem Schritt erledigt.

Wegen ihrer hohen Reinheit eignen sich unsere primaQUANT Master Mixe hervorragend, um eine Kontamination eines Produktes mit Nukleinsäuren oder Nukleasen nachzuweisen bzw. auszuschließen.